肝切除模型

肝部分切除基本以30%、50%、70%和90%肝切除為主，根據(jù)肝葉比例進(jìn)行相應(yīng)切除，但右上葉和右下葉同屬一個(gè)功能單位，兩者有一段融合共用的脈管系統(tǒng)，單獨(dú)切除其中一部分容易損傷殘留肝葉脈管系統(tǒng)的通暢性。肝切除對(duì)肝再生的刺激強(qiáng)度與所切除肝臟的質(zhì)量有直接的關(guān)系，切除量大于85%或小于30%均可導(dǎo)致再生緩慢。

構(gòu)建小鼠 70%肝臟切除模型

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇：

小鼠肝臟分葉結(jié)構(gòu)明顯并都有相對(duì)獨(dú)立的肝靜脈系統(tǒng)和Glisson系統(tǒng)，各肝葉比重相對(duì)固定，便于進(jìn)行不同比例肝部分切除，且其膽囊解剖更接近人類。且小鼠大部分肝切除模型是當(dāng)前研究肝臟再生的最佳模型，可用于模擬肝臟再生的起始、增殖和終止階段。

肝切除模型造模方法:

（一）用2%異氟的烷氣體麻醉小鼠。

（二）腹部消毒后，取劍突下腹部正中豎切口，長(zhǎng)度 1.5cm-3cm，開(kāi)腹時(shí)注意不要損傷腹腔器官組織，依次切開(kāi)表皮、肌層及腹膜，找到肝臟，用鑷子拉開(kāi)并固定兩側(cè)腹肌，充分暴露肝臟。

（三）用眼科剪游離與肝臟相關(guān)的韌帶，先后結(jié)扎肝中葉及左外側(cè)葉并切除，注意保留膽囊；結(jié)扎時(shí)要靠近肝葉基底，盡量減少肝葉的殘留和對(duì)血管的損傷，結(jié)扎時(shí)動(dòng)作要輕柔，避免撕扯到肝下的血管。

但值得注意的是，結(jié)扎中葉時(shí)線結(jié)的位置不能太靠近肝上的腔靜脈，否則會(huì)導(dǎo)致靜脈閉塞或狹窄，阻礙殘留的右葉和尾葉的血液回流，從而導(dǎo)致肝組織的壞死和再生的失敗。因此，線結(jié)的位置應(yīng)該超過(guò)膽囊，但與上腔靜脈的距離應(yīng)不小于2mm。

（四）回納剩余肝組織及腹內(nèi)容物，依次縫合關(guān)腹，縫合后再次消毒切口。術(shù)后禁食禁水6h。皮下注射5%葡萄糖的注射液替代術(shù)中蒸發(fā)損失，出血和液體移位中的液體損失，并作營(yíng)養(yǎng)用，放置于37℃溫箱復(fù)溫6h。

（五）以手術(shù)結(jié)束為0h，根據(jù)分組時(shí)間點(diǎn)要求分別于術(shù)后24h、72h、7d將動(dòng)物處死，稱量并記錄各組再生肝臟的重量，取樣。肝組織收集后迅速-80℃低溫冰箱保存。

構(gòu)建肝臟缺血再灌注損傷模型

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇

缺血再灌注損傷實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ投噙x用大鼠等嚙齒類動(dòng)物來(lái)建立。相對(duì)與大小鼠而言，小鼠具有飼養(yǎng)成本低、空間利用率高、藥劑消耗量小、操作同步性好等優(yōu)點(diǎn)。

動(dòng)物品系：Balb/c小鼠，雄性，周齡為6-8w

造模方法

1、 術(shù)前12h禁食，自由飲水。

2、 腹腔注射麻醉，麻醉成功后將小鼠平躺在手術(shù)的臺(tái)上膠帶固定四肢，將小鼠腹部術(shù)去毛，用碘酒和75％乙醇術(shù)區(qū)消毒。

3、 取腹正中切口1cm，打開(kāi)腹腔，小心分離出肝臟供血的門(mén)靜脈和肝動(dòng)脈。

4、 用無(wú)創(chuàng)血管的夾夾閉門(mén)靜脈和肝動(dòng)脈，0.5min后，肉眼可見(jiàn)阻斷葉明顯變白，說(shuō)明阻斷成功，用止血的鉗夾閉皮膚切口臨時(shí)關(guān)閉腹腔，將小鼠放恒溫加熱毯上保溫。

5、 完成持續(xù)缺血60min后，重新打開(kāi)腹腔，迅速取出血管的夾，恢復(fù)缺血肝血流，0.5min左右可見(jiàn)缺血區(qū)肝臟由白色逐漸恢復(fù)為鮮紅色表明再灌注成功，逐層縫合腹腔肌肉和皮膚關(guān)閉腹腔，完成手術(shù)。待小鼠清醒后放回飼養(yǎng)室飼養(yǎng)，密切關(guān)注小鼠的狀態(tài)及生存狀況并做好記錄。